ارائه کننده : طاها رجبی

استاد راهنما: دکتر منصور کریمی جشنی

استاد مشاور: دکتر مسعود شمس بخش

تاریخ :  1405/07/13

ساعت : 14:00

مکان: سالن سمینار شماره 2

چکیده: 

افکتورهای ترشحی قارچ Cladosporium fulvum عامل بیماری کپک برگی گوجه‌فرنگی نقش مهمی در  برهمکنش  بیمارگر با گیاه میزبان و توسعه بیماری دارند. باتوجه‌به اطلاعات محدود موجود درباره عملکرد افکتور کاندیدا CfPhiA-1، پژوهش حاضر با هدف بررسی ویژگی‌های مولکولی و عملکردی این پروتئین و تبیین نقش احتمالی آن در برهمکنش C. fulvum با گوجه‌فرنگی انجام شد. بدین منظور، تنوع توالی ژن CfPhiA-1 در ۱۲۰ جدایه ژاپنی، زمینه ژنومی و عناصر تکراری اطراف آن، الگوی بیان ژن طی آلودگی، اثر بیش‌بیانی ژن بر بیماری‌زایی، ویژگی‌های پروتئین نوترکیب و پروتئین‌های برهم‌کنش‌کننده با آن مورد بررسی قرار گرفت و در ادامه تحلیل‌های ساختاری و داکینگ مولکولی انجام شد. نتایج نشان داد که CfPhiA-1 در جدایه‌های مورد بررسی از حفاظت توالی بالایی برخوردار است و تنها یک تغییر در سطح پروتئین، شامل حذف فنیل‌آلانین در موقعیت ۴۷، مشاهده شد. بررسی بیان ژن با استفاده از RT-qPCR و RNA-seq افزایش چشمگیر بیان CfPhiA-1 را در جریان آلودگی گوجه‌فرنگی نشان داد که بیانگر ارتباط این ژن با مراحل پیشرفته‌تر استقرار و توسعه بیماری است. همچنین، ایجاد و ارزیابی بیماری‌زایی سویه‌های بیش‌بیان‌کننده CfPhiA-1 نشان داد که افزایش بیان این ژن با تشدید علائم بیماری و افزایش زیست‌توده قارچی همراه است. پروتئین نوترکیب CfPhiA-1 نیز با موفقیت در سامانه Pichia pastoris تولید و حضور آن تأیید شد. نتایج آزمون Pull-down شواهدی از برهم‌کنش احتمالی CfPhiA-1 با یک پروتئین گیاهی از خانواده کیتینازها فراهم کرد و نتایج مدل‌سازی ساختاری و داکینگ مولکولی نیز تشکیل یک کمپلکس پروتئینی پایدار میان CfPhiA-1 و کیتیناز را از نظر محاسباتی پشتیبانی نمود. در مجموع، یافته‌های این پژوهش شواهد ارزشمندی در حمایت از نقش CfPhiA-1 در زیست‌شناسی و بیماری‌زایی C. fulvum و احتمال مشارکت آن در تعامل با اجزای دفاعی گوجه‌فرنگی فراهم می‌کند و این پروتئین را به‌عنوان یک عامل کاندیدای مهم برای مطالعات آینده در زمینه سازوکارهای مولکولی بیماری‌زایی C. fulvum معرفی می‌نماید.