ارائه کننده: سیده مهدیس سادات

استاد راهنما: دکتر حسین سلطانی نژاد

استاد مشاور: دکتر سامان حسینخانی

داور داخلی: دکتر صادق حسن نیا

داور خارجی: دکتر مجید صادقی زاده

نماینده تحصیلات تکمیلی: دکتر صادق حسن نیا

چکیده:

 سرطان دهانه رحم چهارمین سرطان شایع در زنان سراسر جهان است که بیش از 99 درصد موارد آن ناشی از ویروس پاپیلومای انسانی (HPVs) می باشد. تشخیص زودهنگام HPV به ویژه انواع پرخطر آن (HR-HPVs) برای جلوگیری از پیشرفت بیماری ضروری است. به گفته سازمان جهانی بهداشت، رویکرد ایده آل برای شناسایی پاتوژن های خارجی باید سریع، با اختصاصیت و حساسیت بالا، ، بدون نیاز به ابزار و مقرون به صرفه باشد؛ بنابراین نیاز اساسی به توسعه ابزارهای جدید تشخیص نوکلئیک اسید با ویژگی های ذکر شده وجود دارد. سیستم‌های CRISPR-Cas، از جمله CRISPR-Cas12a و CRISPR-Cas13a، به دلیل حساسیت و اختصاصیت بالا، قیمت مناسب و عدم نیاز به ابزارهای خاص آزمایشگاهی و پرسنل ماهر، در تشخیص نوکلئیک اسید به کار گرفته شده و مسیر جدیدی را در سنجش های زیستی پایه گذاری نموده اند. در این پژوهش برای تشخیص ژنوم ویروس HPV16   gRNAای طراحی شده است که در صورت اتصال صحیح با Cas12a و تشکیل کمپلکس ریبونوکلئوپروتیینی، توالی هدف تشخیص داده شده و کارایی آن در اتصال به توالی مذکور که در نهایت بر کارایی کمپلکس تاثیر خواهد گذاشت، بررسی خواهد شد. بدین منظور پس از انتخاب ناحیه دقیق توالی هدف و طراحی gRNA   با استفاده از ابزار های بیوانفورماتیکی، سیستم CRISPR-Cas12a با غلظت مناسب آماده و تست های سنجش فعالیت برش هدفمند و فعالیت جانبی آنزیم در حضور مولکول گزارشگر سنجیده خواهد شد. پیش بینی می شود gRNA طراحی شده کارآمد بوده و توالی هدف با حساسیت مناسب تشخیص داده شود؛ که خود گامی کوچک در راستای استفاده از روش های تشخیصی POCT در آینده می باشد.