ارائه دهنده: مینا مکرم دوست دلخواه

استاد راهنما: دکتر فرنگیس عطائی

استاد راهنمای دوم: دکترامیر علی حمیدیه

استاد مشاور: دکتر سامان حسینخانی

داور داخلی: دکتر صادق حسن نیا

داور خارجی: دکتر مریم بهفر

نماینده تحصیلات تکمیلی: دکتر صادق حسن نیا

تاریخ : ۱۴۰۵/۰۳/۱۱

ساعت: 12:30 

مکان : اتاق دفاع -5009 

چکیده :

 آنتی‌ویروس‌ها به‌عنوان یکی از مهم‌ترین ناقل‌های ژنی، کاربرد گسترده‌ای در ژن‌درمانی، مطالعات مولکولی و مهندسی ژنتیک دارند. هدف از این مطالعه، تولید لنتی‌ویروس نوترکیب حاوی ژنIDUAو تعیین تیتر ویروس تولیدشده با استفاده از روش Real-Time PCR بود. در ابتدا تلاش شد ژنIDUAبا استفاده از پرایمرهای اختصاصی کلونینگ تکثیر شود، اما محصول اختصاصی مناسبی حاصل نشد. پس از انجام واکنش‌های مختلف PCR با غلظت‌های متفاوت بتائین و DMSO و همچنین طراحی پرایمرهای جدید به صورت Nested PCR، باند اختصاصی ژن مشاهده گردید. محصول PCR جهت تعیین توالی ارسال شد، اما به دلیل عدم خوانش صحیح توالی و جلوگیری از اتلاف زمان، سنتز مستقیم ژن در وکتور pCDH انجام گرفت. پس از ترنسفورماسیون و استخراج پلاسمیدها، کیفیت و غلظت DNA استخراج‌شده با دستگاه نانودراپ بررسی شد و نتایج نشان‌دهنده خلوص و غلظت مناسب پلاسمیدها بود. در ادامه، سلول‌های HEK293T با استفاده از پلاسمید ترنسفر و پلاسمیدهای کمکی ترنسفکت شدند و سوپرناتانت حاوی لنتی‌ویروس جمع‌آوری گردید. سپس RNA ویروسی استخراج و پس از سنتز cDNA، تیتر ویروس با استفاده از تکنیک Real-Time PCR تعیین شد. نتایج نشان داد که لنتی‌ویروس تولیدشده دارای تیتر مناسب جهت استفاده در آزمایش‌های ترنسداکشن سلولی می‌باشد.